如何簡化葉綠素含量測定步驟
如何簡化葉綠素含量測定步驟
葉綠素含量是反映植物特別是光合機(jī)構(gòu)生理狀況的一個(gè)基本指標(biāo),植物生理研究中經(jīng)常涉及葉綠素含量的測定。一般的測定方法都包括葉片稱重、研磨、沖洗、過濾和定容(25 mL或更多)及稀釋等繁瑣步驟,既費(fèi)時(shí)間,又費(fèi)溶劑,不適于科學(xué)研究中大批量樣品的測定,特別是以葉片鮮重表示的葉綠素含量,不僅容易受葉片含水量變化的干擾,給測定結(jié)果帶來偏差,而且也不便于同以單位葉面積表示的光合速率聯(lián)系起來分析兩者的關(guān)系。目前已經(jīng)有很多新的方法出現(xiàn)，如葉綠素儀測定法，和本文要講到的葉絲浸提法。其中葉綠素儀法比較簡單，直接將便攜式葉綠素儀帶到田間，夾在葉片正反面，然后按下測試鍵，就可也得到SPAD值，SPAD值代表的是葉片的葉綠素含量值。另外SPAD和氮元素含量也有一定的關(guān)系，可以指導(dǎo)施肥。正因?yàn)闇y出的值是SPAD值，葉綠素儀又可以叫做SPAD502葉綠素儀。
葉絲浸提法包括取樣、浸提、比色和計(jì)算。以前一般采用的研磨過濾方法提取葉綠素,不僅費(fèi)時(shí)間,從稱重到定容結(jié)束,1個(gè)樣品至少需要10min,而且由于不可避免的損失,所得到的結(jié)果一般會低一些;而用本文中的葉絲浸提法,不算浸提的等待時(shí)間,從取樣、切細(xì)到投入80%丙酮浸提的操作時(shí)間一般不超過1~2min,而且可以避免過濾造成的損失。從用兩種方法測定的結(jié)果可以看到,用葉絲浸提法得到的葉綠素提取液可以直接用于比色測定光密度,不需要過濾或離心。雖然在用葉片細(xì)絲的浸提液中含有少量浸出物的雜質(zhì),但由于其對比色波長的光沒有明顯的吸收,所以測定的結(jié)果受到的影響并不明顯。另外，葉片水分含量的不同，也會造成葉綠素含量的不同，一般，含水量高的葉片，其葉綠素含量明顯降低，這個(gè)我們在具體操作時(shí)是需要注意的。
